Nicole De Boer urodziła się w Toronto w Kanadzie. Swoją karierę aktorską zaczęła w bardzo młodym wieku. Pierwszą główną rolę dostała w szkolnym przedstawieniu "The Wizard of Oz". Swój debiut telewizyjny zaliczyła w wieku 11 lat w programie "Freddy the Freeloader's Christmas Dinner", gdzie wystąpiła u boku takich gwiazd jak
Red Skelton i
Vincent Price. Przez całe dzieciństwo występowała głównie w sztukach teatralnych i reklamach.
W wieku 17 lat dostała swoją pierwszą regularną rolę w kanadyjskim serialu "
9B". Następnie były role w kolejnych serialach, między innymi w "The Kids in the Hall", "
Beyond Reality" oraz "
Catwalk". W 1992 roku zadebiutowała w pełnometrażowym filmie "
Prom Night IV: Deliver Us from Evil". Później zagrała jeszcze w takich filmach jak "
Senior Trip" i "
Kids in the Hall: Brain Candy".
W 1997 roku pojawiła się w filmie
Vincenzo Natali "
Cube", nowatorskiej produkcji opowiadającym o grupie osób zamkniętych w wielkim sześcianie składającym się z wielu pomieszczeń, pełnym morderczych pułapek. Zagrała tam młodą dziewczynę, Leaven, studentkę nauk ścisłych. Była to pierwsza z jej ról, która przyniosła aktorce światowy rozgłos.
Rok po występie u
Nataliego, De Boer zagrała swoją drugą ważną rolę. Po odejściu
Terry Farrell z serialu "
Star Trek: Deep Space Nine", aktorka dostała propozycję zastąpienia jej w siódmym sezonie serii. Zagrała tam postać Ezri Dax, przedstawicielkę rasy Trillów.
Po roku 2000 aktorka zgrała kilka gościnnych ról w serialach takich jak: "
Po tamtej stronie", "
Mroczne dziedzictwo", "
Martwa strefa", "
Gwiezdne wrota: Atlantyda". Wystąpiła również w kilku filmach, między innymi w "
Tornado w Nowym Jorku", "
Koszmar", "
Magnetyczne tornado".
W 1999 roku De Boer poślubiła muzyka
Johna Kastnera, z którym ma córkę Summer. Obecnie małżonkowie są w separacji.